z新外标法顶空进样器气相色谱法检测环氧乙烷(EO)灭菌残留量操作流程
编者:懂生,深圳市三利公司,该流程仅作参考,望根据实际情况中要以国家标准为依据!
1.原理
在一定温度下,用萃取剂——水萃取样品中所含环氧乙烷(EO),用顶空气相色谱法测定环氧乙烷含量。
2. 检测依据 GB/T 16886.7-2001生命科学生物学评价 第七部分 ISO 10993.7-2008 EO灭菌残留量 3. 使用仪器 GC2020 气相色谱仪 (FID检测器);氮氢空一体机 ;毛细色谱柱 ;顶空进样瓶 20mL (包括硅胶封口垫,聚四氟乙烯膜,封口钳); 分析天平 / 精度0.1mg;容量瓶 50mL/100mL 。
4.职责
操作人员严格按规定要求进行操作,确保操作过程中的精密度。
5.气相色谱仪条件(参考)
参数 |
设定值 |
柱室温度 |
80℃ |
汽化室温度 |
200℃ |
FID检测器温度 |
240℃或250℃ |
解析时间 |
12h |
进样量 |
0.5uL |
氮气气流量 |
15mL/min~30mL/min; |
氢气 |
30mL/min |
空气 |
300mL/min |
柱前压 |
0.65mp |
顶空进样平衡温度 |
80 |
平衡时间 |
20min |
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6 环氧乙烷标准贮备液的配制
取干燥的100 ml容量瓶,加入60 m1水,精密称定;在冰水浴中吸取液态环氧乙烷约1.2 ml放入该容量瓶中,摇匀,密塞,称定重量,前后两次称重之差,即为溶液中所含环氧乙烷重量;再加水至刻度。精密量取1mL至1 000 mL量瓶中, 加水稀释至刻度,即得(每1 mL含环氧乙烷12. 519 ug)。作为标准贮备液,低温保存备用。
7. 试样制备
7.1试验样制备应在取样后立即进行,否则应将供试样品封于由聚四氟乙烯密封的金属容器中保存。
7.2将样品截为5㎜长碎块,取1.g放入萃取容器中,加5mL水(或取2.0g放入萃取容器中,加10mL水,)容器内压力为常压,在恒温水浴60℃±1℃中放置20min后做试样备用。
8.试验步骤
8.1用贮备液配制1×10-3g/L~1×10-2g/L六个系列浓度的标准溶液。
在冰浴条件下,将上述对照品溶液定量稀释成每1 mL 含环氧乙烷对照品0. 417 3、0. 834 6、2. 087、4. 173、8. 346、12. 52 ug的系列标准溶液, 分别取5mL置于顶空瓶中, 按气相色谱法测定。
或在冰浴条件下,依次精密吸取标准储备溶液0.5、1、2、3、4和5 m1(注意标上序号!浓度依次为0. 417 3、0. 834 6、2. 087、4. 173、8. 346、12. 52 ug),分别置于20 m1的顶空瓶中,精密加水至5 m1,封盖,摇匀。按气相色谱法测定。实际操作是:依次把装有六个系列浓度的标准溶液放入顶空进样器对应的位置,开始测定。每个样品平衡温度5-10分钟后,按启动键(顶空上)启动机器联动,即顶空进样和色谱工作站同时启动。保存每次环氧乙烷标准溶液的图谱。注意其峰高或面积。
8.2用标准样所测数据,绘出标准曲线。参考工作站说明书(电子版)。
8.3依据该标准曲线,用外标法测定样品的环氧乙烷(EO)灭菌残留量。
9. 注意事项 9.1 气相色谱仪中FID检测器关火时应先关闭氢气通路,然后关闭空气通路。 9.2 气相色谱仪在关机前,应将进样口、柱温箱和FID检测器温度降至室温或低于50℃才可关机。 9.3 制备样品的分析人员进行的所有工作,包括化学试剂的使用,应在通风橱内进行,并穿戴防护衣。使用化学药品之前应阅读材料安全方面的说明。环氧乙烷(EO)还需要在冰浴中操作。 9.4 在一个分析中尽量同一人操作。保证实验的正确性。
9.5 气化垫在一定时间后需要更新,每次需要注意进样气化垫是否漏气。 参考:
平衡温度80℃
试液制备
1 截为5mm长的碎块,取1.0g放入20ml萃取容器中,精密加水5ml,密封80℃ 平衡20
分钟
2环氧乙烷制备标准贮备液
取干燥的50ml容量瓶,加水30ml,加瓶塞,精确称重,用注射器注入约0.6ml环氧乙烷,不加瓶塞,轻轻摇匀,盖好瓶塞,前后两次称重之差,即为溶液中环氧乙烷的重量。加水制成约10mg/ml的环氧乙烷溶液,作为标准贮备液
取1ml的贮备液稀释到100ml的容量瓶中,即得到1ug/ml
同样的方法制成1ug/ml~10ug/ml六个梯度溶液
精确量取5ml置20ml萃取容器中,密封,恒温60摄氏度40分钟
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10六种标液
移液管100~1000ul,5ml各一支 |